| 天网零号抑制小鼠肿瘤作用试验资料
摘要
用昆明小鼠测定了天网零号对小鼠抑瘤率，免疫功能试验。结果显示：
1. 抑瘤率
天网零号 6 、 12 、 24g/kg 三个剂量组对小鼠 H 22 肝癌细胞移植瘤的抑瘤率分别为 36.7 ％、 42.0 ％、 50.2 ％，均大于 30 ％；天网零号三个剂量组对小鼠 S180 肉瘤癌细胞移植抑瘤率分别为 13.3 ％、 9.7 ％、 25.3 ％；对艾氏腹水癌细胞移植抑瘤率分别为 1.3 ％、 8.5 ％、 15.7 ％。表明天网零号对 H22 荷瘤鼠有明显的抑瘤作用。
2. 免疫功能试验
天网零号 6 、 12 、 24g/kg 组对小鼠碳廓清吞噬指数分别为 4.36 ± 1.03 、 4.59 ± 0.86 和 4.55 ± 1.35 。与对照相比无统计差异；对小鼠 NK 细胞活性 12 、 24g/kg 组分别为 21.5 ± 10.6 ％， 18.0 ± 11.0 ％，统计处理皆有明显差异（ P<0.01 ）。表明天网零号 12 ， 24g/kg 组可使小鼠 NK 细胞活性明显增加。
1. 材料与方法
1、 材料
试验动物选用山东医科大学试验动物中心提供的雌性昆明小鼠体重 18 － 22g 。
H 22 癌细胞， S 180 瘤癌细胞，艾氏腹水癌细胞株均有山东省医学科学院药物研究所细胞室提供。
天网零号由张茂帅医师提供，中药丸剂，－ 20 ℃冰冻保存备用；环磷酰胺为上海第十二制药厂产品。
1.2 方法
1.2.1. 抑瘤率
将试验小鼠随机分成空白对照表，环磷酰胺组，天网零号低剂量，天网零号中剂量及天网零号高剂量组，每组 10 只。
将 H 22 癌细胞 ， S 180 肉瘤癌细胞，艾氏腹水癌细胞于小鼠左腋窝皮下接种 0.2ml, 接种 24 小时后，空白对照组灌服 0.4ml 生理盐水；环磷酰胺治疗组灌服 30mg/kg 环磷酰胺；天网零号试验组分别灌服 6g/kg 、 12g/kg 和 24g/kg 天网零号，每天 1 次，连续 10 天，停服 24 小时，处死小鼠，取瘤组织并剥离干净粘附的组织，吸干瘤组织周围血液与水分，精确称重瘤重，按下式计算抑瘤率：
抑瘤率（％）＝ [ 对照组平均瘤重（ g ） - 试验组平均瘤重（ g ） ]/ 对照组平均瘤重（ g ）
按以上方法重复三次 , 计算平均瘤重和抑瘤率 .
1.2.2 免疫功能试验
1.2.2.1 小鼠碳廓清试验
将试验小鼠随机分成空白对照表，天网零号低剂量，天网零号中剂量及天网零号高剂量组，每组 15 只。空白对照组灌服 0.4ml—— 生理盐水；天网零号试验组分别灌服 6g/kg 、 12g/kg 和 24g/kg 天网零号，每天 1 次，连续 10 天，停服 24 小时后，进行小鼠碳廓清试验 , 吞噬指数采用以下公式计算 :
LgOD 1 － lgOD 2
K= —————————
t 1 － t 2
体重
吞噬指数 a= －－－－－－ X
肝重 + 脾重
1.2.2.2 小鼠 NK 细胞活性测定
将试验小鼠随机分成空白对照表，天网零号低剂量，天网零号中剂量及天网零号高剂量组，每组 15 只。空白对照组灌服 0.4ml—— 生理盐水；天网零号试验组分别灌服 6g/kg 、 12g/kg 和 24g/kg 天网零号，每天 1 次，连续 10 天，停服 24 小时后，用乳酸脱氢酶测定方法测定 NK 细胞活性 , 用以下公式计算 NK 细胞活性：
反应孔 OD--- －自然释放孔 OD
NK 细胞活性 %=-----------------------------------------X100%
最大释放孔 OD －自然释放孔 OD
2. 结果 :
2.1 天网零号对小鼠癌细胞移植的作用 .
2.1.1 天网零号对小鼠 H 22 癌细胞移植瘤的抑瘤率
三批试验结果表明 , 天网零号 6 、 12 、 24g/kg 三个剂量组对小鼠 H 22 肝癌细胞移植瘤的抑瘤率分别为 36.7 ％、 42.0 ％、 50.2 ％，均大于 30 ％；结果见表 1
天网零号对小鼠 H 22 癌细胞移植瘤的抑瘤率
| 组别 |
剂量 |
N |
瘤重 (g) |
抑瘤率 (%) |
| 空白对照 |
— |
52 |
0.823 ± 0.262 |
— |
| 环磷酰胺 |
30mg/kg |
30 |
0.118 ±0.083** |
85.7 |
| 天网零号 |
6g/kg |
30 |
0.521 ±0.287** |
36.7 |
| 12g/kg |
30 |
0.477 ±0.219** |
42.0 |
| 24g/kg |
30 |
0.410 ±0.271** |
50.2 |
**p<0.01 于空白对照组相比
2.1.2 天网零号对小鼠 S 180 肉瘤癌细胞移植瘤的抑瘤率
三批试验结果表明 , 天网零号三个剂量组对小鼠 S 180 肉瘤癌细胞移植瘤的抑瘤率分别为 13.3%,9.7%,25.3%, 结果见表 2
表 2 天网零号对小鼠 S 180 肉瘤癌细胞移植瘤的抑瘤率
| 组别 |
剂量 |
N |
瘤重 (g) |
抑瘤率 (%) |
| 空白对照 |
— |
52 |
1.292±0.343 |
— |
| 环磷酰胺 |
30mg/kg |
30 |
0.577±0.163** |
55.3 |
| 天网零号 |
6g/kg |
30 |
1.119±0.294 |
13.3 |
| 12g/kg |
30 |
1.166 ±0.570 |
9.7 |
| 24g/kg |
30 |
0.965±0.441 |
25.3 |
**p<0.01 于空白对照组相比
2.1.3 天网零号对小鼠艾氏腹水癌细胞移植瘤的抑瘤率
三批试验结果表明 , 天网零号对小鼠艾氏腹水癌细胞移植瘤的抑瘤率为 1.3%,8.5%,15.7%. 结果见表 3
表 3 天网零号对小鼠艾氏腹水癌细胞移植瘤的抑瘤率
| 组别 |
剂量 |
N |
瘤重 (g) |
抑瘤率 (%) |
| 空白对照 |
— |
52 |
0.710 ± 0.204 |
— |
| 环磷酰胺 |
30mg/kg |
30 |
0.260 ±0.138** |
63.3 |
| 天网零号 |
6g/kg |
30 |
0.701 ±0.306 |
1.3 |
| 12g/kg |
30 |
0.650 ±0.231 |
8.5 |
| 24g/kg |
30 |
0.598 ±0.224 |
15.7 |
**p<0.01 于空白对照组相比
2.2 天网零号对小鼠免疫功能的作用
2.2.1 小鼠碳廓清试验
天网零号 6 、 12 、 24g/kg 组对小鼠碳廓清吞噬指数分别为 4.36±1.03,4.59±0.86, 和 4.55±1.35. 与对照组无统计差异 , 见表 4
表 4 天网零号对小鼠碳廓清试验影响
组别 |
剂量 |
动物数 |
吞噬指数 a |
| 空白对照 |
— |
15 |
4.74±1.04 |
| 低剂量组 |
6 |
15 |
4.36±1.03 |
| 中剂量组 |
12 |
15 |
4.59±0.86 |
| 高剂量组 |
24 |
15 |
4.55±1.35 |
p>0.05 , 于空白对照组相比
2.2.2 小鼠 NK 细胞活性
天网零号 12 、 24g/kg 组对小鼠 NK 细胞活性分别为 21.5±10.6%,18.0±11.0%, 统计处理皆有显著差异 (P<0.01). 结果见表 5
天网零号对小鼠 NK 细胞活性影响
组别 |
剂量 (g/kg) |
动物数 |
NK 细胞活性 (%) |
|
空白对照 |
— |
15 |
9.0±3.7 |
|
低剂量组 |
6 |
15 |
12.6±6.6 |
|
中剂量组 |
12 |
15 |
21.5±10.6** |
|
高剂量组 |
24 |
15 |
18.0±11.0** |
**p<0.01 于空白对照组相比
3 结论
根据《新药临床前研究指导原则》若抑瘤率大于 30%, 进行统计处理有显著差异 (P<0.05) 可评定为有疗效 . 本试验结果证明天网零号 6 、 12 、 24g/kg 三个剂量组对小鼠 H 22 肝癌细胞移植实体的抑瘤率均大于 30%, 统计处理有显著差异 (P<0.01), 并显示较好的剂量效应关系 . 表明天网零号有明显的抑制小鼠 H 22 肝癌细胞移植实体瘤生长作用 .
天网零号 6 、 12 、 24g/kg 组对小鼠碳廓清无明显作用 ,
天网零号 12 、 24g/kg 组对小鼠 NK 细胞活性有统计差异 (P<0.01). 表明天网零号对免疫功能抑制作用 ., 并使小鼠 NK 细胞活性明显增加。
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实验设计： |
孙克任 |
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实验者： |
谢克勤
张 文 |
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实验时间： |
1998.3 |
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资料保存单位： |
山东医科大学毒理研究室 |
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联系人： |
谢克勤 |
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联系电话： |
0531 － 82942132 |
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